各县（市）区农牧局：？

　　根据自治区动物疾控中心《关于举办全区动物防疫职业技能和兽医实验室检验技能竞赛的预备通知》要求，决定于2016年8月，在银川市动物防疫系统范围内开展岗位技能竞赛活动，为确保活动顺利进行并取得实效，请各县(市) 区农牧局按照文件要求做好参赛准备。？

　　一、竞赛类别？

　　1.动物疫病防疫职业技能？

　　2.实验室检验技能？

　　二、竞赛方式？

　　技能竞赛由银川市农牧局工会委员会主办，银川市动物疾病预防控制中心组织实施，选拔出优秀选手代表银川市参加自治区决赛。竞赛采取理论知识考试和现场操作考核相结合的方式。？

　　动物疫病防疫职业技能竞赛：理论考试100分，现场技能操作6项，每项80分，总分580分。？

　　实验室检验技能竞赛：理论考试100分，现场技能操作3项，每项100分，总分400分。？

　　三、竞赛时间？

　　竞赛时间暂定于8月举行，请各县(市) 区提前举办选拔赛推荐选手参加银川市预赛（具体时间另行通知）。？

　　四、竞赛内容？

　　动物疫病防疫职业技能竞赛：按动物疫病防治员国家职业标准的高级（国家职业资格三级）要求，理论知识考试题目由职业技能鉴定国家题库农业分库生成。现场技能操作主要考核鸡翅静脉采血、鸡心脏采血、鸡体解剖与采样、猪前腔静脉和牛尾根采血、猪瘟疫苗免疫注射等操作技能。竞赛方案见附件1。？

　　兽医实验室检验技能竞赛：按照实验室质量管理标准的要求，理论知识考试题目由农业部实验室理论考试习题库生成。细菌的分离和接种、牛布病试管凝集试验和禽流感血凝（HA）/血凝抑制（HI）等试验三项。竞赛方案见附件2。？

　　五、参赛对象及条件？

　　参加兽医实验室检验技能竞赛要求参赛选手必须是参赛地动物疾病预防控制机构实验室正式工作人员,从事兽医实验室工作人员满3年（2013年10月1日前参加工作）；参加动物疫病防疫职业技能竞赛选手必须是参赛地区县级以下（含县级）动物疫病防控工作人员,从事动物疫病防控工作满3年（2013年10月1日前参加工作）,各自组成代表队。预赛阶段以各县(市、区)为单位组成代表队，每支代表队由7人组成（其中领队1人，参赛队员各3人），银川市动物疾控中心组队参加实验室检验技能竞赛。参赛人员必须遵纪守法、政治合格、爱岗敬业，具有扎实的专业知识和良好的操作技能。？

　　六、组织保障？

　　（一）领导小组？

　　组？ 长：黄振亚？ 银川市农牧局党委书记、局长？

　　？副组长： 郝希奋？ 银川市农牧局党委副书记、纪委书记？

　　？？？？？？？？？？？？ 王英斌？ 银川市农牧局工会主席？

　　成？ 员：王？ 勇？ 银川市农牧局党委委员、局长助理、畜牧主管？

　　？？？？？？？ 段洪威？ 银川市动物疾病预防控制中心主任？

　　？王小龙？？？ 银川市动物疾病预防控制中心副主任？

　　（二）实施小组？

　　组？ 长：段洪威？ 银川市动物疾病预防控制中心主任？

　　副组长： 王小龙？ 银川市动物疾病预防控制中心副主任？

　　成？？？？？ 员：比赛筹备工作由以下3个小组负责？

　　理论知识组：王小龙？？？ 倪泽成？？？ 蔡建伟？

　　技能操作组：刘辛赟？？？ 康？ 英？？？ 马建春？

　　后勤服务组：任永丽？？？ 王宁英？？？ 梁？ 瑛？

　 （三）监督组？

　　王？ 勇？ 银川市农牧局党委委员、局长助理、畜牧主管？

　　徐兴国？ 银川市农牧局组织人事科主管？

　　耿？ 晶？ 银川市农牧局工会副主席？

　　（四）评审组？

　　组？ 长：段洪威？

　　为了确保活动顺利开展并取得实效，由组长邀请区市专家成立银川市“动物防疫职业技能和兽医实验室检验技能竞赛”活动评审组。？

　　？七、要求？

　　？各县（市）区农牧局为辖区内技能竞赛活动的牵头单位，要高度重视本次技能竞赛，精心组织，周密部署，积极筹备并举办选拔赛，推荐高水平选手组成市级代表队参加决赛。在预赛中胜出的优秀选手，将代表银川市参加2016年全区动物防疫职业技能和兽医实验室检验技能竞赛。？

　　联系人：马建春？ 13099516298？？ 4091034？

　　传真：0951-4075750？ 邮箱：ycsxmsyz@163.com？

　　银川市动物疾病预防控制中心负责实施本次技能竞赛活动，做好参赛的各项准备工作，并组织赛前和赛后各项培训工作。？

　　八、奖励 ？

　　比赛综合基础理论、操作技能方面得分情况，评选出动物疫病防疫职业技能和实验室检验技能个人优胜奖各3名，参赛选手颁发优秀奖。？

　　？？

　　附件：1、动物防疫职业技能竞赛方案？

　　？？？？？ 2、兽医实验室检验技能竞赛方案？

　　？？

？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？ 　　2016年8月3日？

　　？？　　？？　　？？

　？？

　　？？附件1：？

　　动物防疫职业技能竞赛方案？

　　？？

　　为组织好全市动物防疫职业技能竞赛，特制定方案如下。？

　　全市动物防疫职业技能竞赛采取理论考试和现场操作考核相结合的方式。理论考试100分，现场技能操作6项，每项80分，总分580分。？

　　一、理论考试方案？

　　理论考试采用闭卷方式，题型全为客观题，考题由职业技能鉴定国家题库农业分库生成，与“动物疫病防治员”国家职业技能标准（三级）相关，时间为90分钟。？

　　二、现场操作考核方案？

　　（一）考核项目？

　　包括猪瘟疫苗免疫注射、鸡翅静脉采血、鸡心脏采血、鸡体解剖与采样、猪前腔静脉和牛尾根采血等六项。？

　　（二）技术考点及操作规范？

　　1、猪瘟疫苗免疫注射？

　　1.1操作步骤？

　　查看疫苗批号、是否失真空、是否破损、是否在有效期内。 ？

　　拔掉疫苗和专用稀释液的塑料瓶盖，用注射器吸取2～3mL疫苗稀释液注入疫苗瓶中，上下反复摇匀使疫苗充分溶解，吸取疫苗注回稀释液瓶中，再用稀释液反复冲洗疫苗瓶中的疫苗2～3次，注回稀释液瓶中备用。？

　　选择耳后颈部进行肌肉注射。注射部位用碘伏做点状螺旋式消毒。采用12号针头进行注射，注射完毕后，以干棉球压迫针孔，拔出注射针头。？

　　注射器和针头等废弃物集中进行无害化处理，剩余疫苗暂存冷藏箱，在免疫档案上记录免疫信息。？

　　1.2注意事项？

　　接种前查看疫苗使用说明，按要求稀释疫苗并充分混合均匀，不可剧烈振摇，防止发生气泡和降低效价。？

　　进针后，注射疫苗前先抽回活塞，若有回血时，表明针头刺入血管内，应稍稍拔针不见回血时再注射。注射时，疫苗应缓慢推入。？

　　2、鸡翅静脉采血？

　　侧卧保定，展开翅膀，露出腋窝部，拔掉羽毛，在翅下静脉处消毒。用碘伏做点状螺旋式消毒。？

　　拇指压迫近心端，待血管怒张后，用采血器针头平行刺入静脉，放松对近心端的按压，缓缓抽取血液，采血量不少于2mL。？

　　采血完毕及时用干棉球压迫采血处止血，避免形成淤血块。？

　　3、鸡心脏采血？

　　3.1操作步骤？

　　成年鸡心脏采血：取侧卧或仰卧保定。侧卧保定采血，助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，在触及心搏动明显处，或胸骨脊前端至背部下凹处连线的1/2处消毒（用碘伏做点状螺旋式消毒），垂直或稍向前方刺入2～3cm，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血器，采血量不少于2mL，拔出针头后用干棉球压迫止血。仰卧保定采血，胸骨朝上，用手指压迫嗉囊，露出胸前口，消毒术部（用碘伏做点状螺旋式消毒），用装有长针头的采血器，将针头沿其锁骨俯角刺入，顺着体中线方向水平刺入心脏，采血量不少于2mL，拔出针头后用干棉球压迫止血。？

　　3.2注意事项？

　　确定心脏部位，切忌将针头刺入肺脏。？

　　顺着心脏的跳动频率抽取血液，切忌抽血过快。？

　　4、鸡体解剖与采样？

　　4.1操作步骤？

　　将鸡不放血致死；？

　　将处死鸡浸于消毒液中使羽毛浸湿，洗去尘垢、污物；？

　　先将腹壁和大腿内侧的皮肤切开，用力将大腿按下，使髋关节脱臼，将两大腿向外展开，从而固定尸体；？

　　于胸骨末端后方将皮肤横切，与两侧大腿的竖切口连接，然后将胸骨末端后方的皮肤拉起，向前用力剥离到头部，使整个胸腹及颈部的皮下组织和肌肉充分暴露；？

　　在胸骨后腹部横切穿透腹壁，从腹壁两侧沿肋骨头关节处向前方剪断肋骨和胸肌，然后握住胸骨用力向上向前翻拉，露出体腔；？

　　对剪刀和镊子消毒，采集肺脏（单侧、2/3以上）； ？

　　对剪刀和镊子消毒，采集肝脏（不带胆囊的一叶）；？

　　对剪刀和镊子消毒，采集脾脏；？

　　对剪刀和镊子消毒，采集肾脏（单侧、2/3以上）；？

　　从口腔下剪，剪开颈部皮肤肌肉，使喉头暴露；？

　　对剪刀和镊子消毒，采集喉头、气管；？

　　剪开头部皮肤，打开头骨；？

　　对剪刀和镊子消毒，采集脑组织（1/3以上）。？

　　4.2注意事项？

　　采集样品时剪刀和镊子的消毒采用火焰消毒法，采集的组织分别放入事先准备的器皿中。？

　　5、猪前腔静脉采血？

　　5.1站立保定采血操作步骤？

　　将保定绳套在猪嘴上，拉紧另一端，使猪的头颈与水平面呈30°以上角度，偏向一侧。？

　　选择颈部最低凹处，用碘伏做点状螺旋式消毒，使针头偏向气管约15°方向下针，回抽见有回血时，即把针芯向外拉使血液流入采血器，采集血液5mL。？

　　5.2仰卧保定采血操作步骤？

　　把前肢向后方拉直；？

　　选取胸骨端与耳基部的连线上胸骨端旁2cm的凹陷处，用碘伏做点状螺旋式消毒；？

　　用采血器刺入消毒部位，针刺方向为向后内方与地面呈60°角刺入2～3cm，当进入约2cm时可一边刺入一边回抽针管内芯；刺入血管时即可见血液进入采血器内，采血量不少于５mL，拔出针头后用干棉球压迫止血。？

　　6、牛尾根采血？

　　6.1操作步骤？

　　助手将牛牵好或保定后，牛不要左右活动，采血者左手托起牛尾巴，与水平线成45°角左右。？

　　在离尾根10厘米左右中点凹陷处，右手用酒精棉球消毒，然后用动物用一次性连续采血器针头垂直刺入（约0.5cm深），见有回血即可抽血，一般采集5ml即可。？

　　拔出采血针，用酒精棉球压一下针孔防止出血。抽血完成后，旋出拉杆，装回针头保护套。？

　　6.2注意事项？

　　保定后选择最佳采血点，即为牛第4、5尾椎骨交界中点凹陷处，此处进针时要掌握好方向、角度、深度，当出血不流畅时要调节进针深度。？

　　采血部位要用75%的酒精棉球消毒，防止感染。？

　　在进行尾部采血时，采血者要上身前倾，腿后移，以防被牛踢伤。？

　　三、评分办法？

　　理论考试结束后，由裁判组对试卷进行装订后，集中评分。现场操作考核结束后，由裁判组按照评分细则对操作的规范性、准确性和用时等进行评分。总分按理论考试分数和现场操作考核分数相加计算。？

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　　附件2：？

　　兽医实验室检验技能竞赛方案？

　　？？

　　为组织好全市实验室检验技能竞赛，特制定方案如下。？

　　一、理论考试方案？

　　按照实验室质量管理标准的要求，理论考试采用闭卷方式，考试题目由农业部实验室理论考试习题库生成（登陆宁夏兽医网下载专区点击下载）。时间为90分钟。？

　　二、现场操作考核方案？

　　（一）考核项目？

　　细菌的分离和接种、牛布病试管凝集试验和禽流感血凝（HA）/血凝抑制（HI）等试验三项。？

　　（二）技术考点及操作规范？

　　1、细菌分离和接种？

　　1.1平板划线分离法。方法是先将接种环灭菌后，左手打开皿盖，使盖与底约成30。蘸取标本均匀涂布于平板培养基边缘一小部分（Ⅰ区），将接种环炎焰灭菌，待冷却后再通过Ⅰ区3—4次后连续划线（Ⅱ区），依次可划线3个区，每一区细菌数逐渐减少，直至分离出单个菌落为止。？

　　1.2液体接种法。 方法是接种环蘸取菌种，倾斜液体培养基管，先在液面与管壁交界处摩擦接种物（以试管直立液体能淹没接种物为准），然后再在液体中摆动2—3次接种环，塞好棉塞后轻轻混合即可。？

　　1.3斜面接种法。方法是从平板培养物上用接种环钓取单个菌落或培养物，由培养基中央直刺到距管底部自下而上划一条直线，再从底部开始向上划曲线接种斜面部分。？

　　1.4注意事项。严格的无菌操作。划线接种时，尽可能做到直、密、匀，并有效地利用培养基表面以达到充分分离的目的。？

　　2、牛布病试管凝集试验？

　　2.1操作步骤？

　　a每份血清用4支试管。？

　　b标记检验编码后第一管加1.20mL稀释液。？

　　c第2～4管各加入0.50mL稀释液。？

　　d然后吸取被检血清0.05mL；加入第1管内，并混合均匀。混合方法是将该试管中的混合液吸入吸管内，再沿试管壁吹入试管中，如此吸入、吹出3～4次，充分混匀后以该吸管吸混合液0.25ml弃去，？

　　e取0.50mL混合液加入第2管，用该吸管如前述方法混合。？

　　f再吸第2管混合液0.50mL至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去混匀液0.50mL。？

　　g稀释完毕，从第1至第4管的血清稀释度分别为1：12.5、1：25、1：50和1：100。？

　　h将0.50mL20倍稀释的抗原加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，牛的血清稀释度则依次变为1：50、1：100、1：200和1：400。？

　　i试管凝集试验参照比浊管的制备？

　　？？

　　表1？？？？？？？？？？？？？ 参照比浊管的配制？

　　？？

　　2.2结果判定？

　　a将试验试管置37℃～40℃温箱24h，取出检查并记录结果。？

　　b每次试验均应设阳性血清、阴性血清和抗原对照。？

　　阴性血清对照：阴性血清的稀释和加抗原的方法与受检血清同。？

　　阳性血清对照：阳性血清须稀释到原有滴度，加抗原的方法与受检血清同。？

　　抗原对照：1：20稀释抗原液0.50mL，再加0.50mL稀释液，观察抗原是否有自凝现象。？

　　c结果判定？

　　凝集反应程度分为：？

　　参照比浊管，按各试管上层液体清亮度判读？

　　++++菌体完全凝集，100％下沉，上层液体100％清亮；？

　　？+++菌体几乎完全凝集，上层液体75％清亮；？

　　++菌体凝集显著，液体50％清亮；？

　　？？？ +凝集物有沉淀，液体25％清亮；？

　　？？？ -集物无沉淀，液体均匀混浊。？

　　d出现“++”以上凝集现象时，受检血清判定为阳性。？？ ？

　　3、禽流感血凝（HA）/血凝抑制（HI）试验。？

　　3.1血凝（HA）试验？

　　a在微量反应板的1孔～12孔均加入0.025mL PBS，换滴头。？

　　b吸取0.025mL病毒悬液（如感染性鸡胚尿囊液）加入第l孔，混匀。？

　　c从第1孔吸取0.025mL病毒液加入第2孔，混匀后吸取0.025mL加入第3孔，如此进行对倍稀释至第11孔，从第11孔吸取0.025mL弃之，换滴头。？

　　d每孔再加入0.025mL PBS。？

　　e每孔均加入0.025mL 1%鸡红细胞悬液（将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。？

　　f振荡混匀，在室温（20～25℃）下静置40min后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下反应1小时）。对照孔红细胞将成明显的钮扣状沉到孔底。？

　　g结果判定？ 将板倾斜，观察血凝板，判读结果。？

　　3.2 回滴试验（无此步骤或回滴不准确终止试验）。？

　　？配备抗原试剂要本着节约的原则，有严重浪费者将扣除一定分值。？

　　3.3血凝抑制（HI）试验？

　　a根据HA试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如，如果血凝的终点滴度为1:256，则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64（256除以4）。？

　　b在微量反应板的1孔～11孔加入0.025mL PBS，第12孔加入0.05mL PBS。？

　　c吸取0.025mL血清加入第1孔内，充分混匀后吸0.025mL于第2孔，依次对倍稀释至第10孔，从第10孔吸取0.025mL弃去。？

　　d 1孔～11孔均加入含4HAU混匀的病毒抗原液0.025mL，室温（约20℃）静置至少30min。？

　　e 每孔加入0.025mL体积分数为1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可置4℃条件下进行），对照红细胞将呈显钮扣状沉于孔底。？

　　f 结果判定？

　　以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。要求结果准确。？

　　3.4填与血凝、血凝抑制试验原始记录表。？

　　4、安全防护意识？

　　根据所做实验选择相应的个人防护装备，如工作服、防护服、口罩、帽子、手套、鞋套等安全防护用品。？

　　穿戴防护装备顺序：依次为工作服、口罩、帽子、鞋套、ＰＥ手套、乳胶手套。？

　　三、评分办法？

　　理论考试结束后，由裁判组对试卷进行装订后，集中评分。现场操作考核结束后，由裁判组按照评分细则对操作的规范性、准确性和用时等进行评分。总分按理论考试分数和现场操作考核分数相加计算。？

附件：